首頁 >>> 公司新聞 >

公司新聞

細(xì)胞周期的測定操作步驟

細(xì)胞周期的測定操作步驟


1、細(xì)胞生長至指數(shù)期時,向培養(yǎng)液中加入BrdU,使終濃度為10μg/ml。


2、44小時加秋水仙素,使每ml中含0.1μg。


3、48小時后常規(guī)消化細(xì)胞至離心管中,注意培養(yǎng)上清的漂浮細(xì)胞也要收集到離心管中。


4、常規(guī)染色體制片(見第三部分:染色體技術(shù))。


5、染色體玻片置56℃水浴鍋蓋上,鋪上2×SSC 液,距紫外燈管6cm處紫外照射30分鐘。


6、棄去2×SSC液,流水沖洗。


7、Giemsa液染色10分鐘,流水沖洗,晾干。


8、鏡檢100個分裂相,計、二、三、四細(xì)胞期分裂指數(shù)。


9、計算: 細(xì)胞周期(Tc)=48/{(M1+2M2+3M3+4M4)/100}(小時)


附:(1)BrdU配制: BrdU 10mg十雙蒸水10ml 4℃下避光保存。


(2)2×SSC配制: NaCl 1.75克,檸檬酸三鈉•2H2O 0.88克,加水至100ml,4℃保存。