細胞凍存和復蘇的zui 佳時間:
細胞在體外生長期間,通常分為三個階段:潛伏期、指數(shù)生長期和平臺期。潛伏期通常是細胞剛剛傳代,此時細胞開始貼附基質(zhì)和伸展骨架,代謝活動集中在粘附蛋白和骨架蛋白的表達,細胞數(shù)量在這段時間內(nèi)幾乎沒有增加。
隨后,細胞開始指數(shù)生長期,轉(zhuǎn)錄翻譯過程旺盛,胞內(nèi)物質(zhì)、信號傳遞迅速,細胞數(shù)量迅速增長。如果在這個時期凍存,實際上是強行將細胞凍結(jié)在代謝的某一時刻,勢必造成對解旋的DNA、轉(zhuǎn)錄翻譯中的RNA和蛋白的機械損傷,增加個別環(huán)節(jié)發(fā)生錯誤的風險。
隨著細胞數(shù)量的增長,培養(yǎng)容器內(nèi),細胞匯合達到90%以上。大部分細胞因為“接觸抑制”而停止高速代謝和增殖,胞內(nèi)活動趨于平緩。所以,建議在剛剛進入平臺期時凍存細胞,既可以獲得足量的細胞,也不會對細胞造成過多的機械損傷。